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實驗動物細(xì)菌學(xué)監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

2010-07-20 [1547]

主體內(nèi)容:
1. 標(biāo)本的采集
正常動物細(xì)菌檢測主要檢查呼吸道和腸道,分別取氣管分泌物及腸內(nèi)容物做細(xì)菌培養(yǎng)檢查。對于發(fā)病動物,采取其病變組織和臟器做細(xì)菌學(xué)檢查。
2. 細(xì)菌的培養(yǎng)
細(xì)菌是單細(xì)胞的原核生物,絕大部分都可以在人工培養(yǎng)基上進(jìn)行繁殖,只有少數(shù)例外,如泰澤病原體需在活細(xì)胞中繁殖。不同細(xì)菌種類所要求的zui適生長條件不盡相同,有些細(xì)菌需在有氧的環(huán)境下才能生長,稱為需氧菌;有些只能在無氧環(huán)境下生長,稱為厭氧菌;還有一些細(xì)菌在有氧、無氧環(huán)境下都可以生長,稱為兼性厭氧菌。
培養(yǎng)細(xì)菌的目的,是從不純的被檢材料中找出特定的細(xì)菌或全部細(xì)菌,這一過程稱為分離培養(yǎng)。如果只是培養(yǎng)性質(zhì)明確的一種細(xì)菌,則稱為純培養(yǎng)。為了從被檢材料中分離出所要檢查的細(xì)菌,可以利用多種性質(zhì)不同的選擇性培養(yǎng)基,檢查各種不同的目的細(xì)菌。
(1)培養(yǎng)基的種類:按物理性狀可把培養(yǎng)基分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基三種。
(2)細(xì)菌培養(yǎng)的方法:培養(yǎng)細(xì)菌的目的不同,其方法也不盡相同,通常把細(xì)菌的培養(yǎng)方法分為一般培養(yǎng)法、二氧化碳培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法三種:
①一般培養(yǎng)法 一般培養(yǎng)法又稱需氧培養(yǎng)法,將已接種好的平皿、斜面或液體培養(yǎng)基等,置于37℃孵育箱內(nèi)培養(yǎng)18~24h,一般細(xì)菌即可于培養(yǎng)基上生長。但也有少數(shù)生長緩慢的細(xì)菌,需培養(yǎng)2~7d甚至更長時間才能生長。
②二氧化碳培養(yǎng)法 某些細(xì)菌如腦膜炎奈毖氏菌、布魯桿菌及肺炎支原體等,需要在一定的二氧化碳環(huán)境下才能良好生長,即二氧化碳培養(yǎng)法,常用的有二氧化碳培養(yǎng)箱、燭缸法、重碳酸鈉—鹽酸法。
③厭氧培養(yǎng)法 有些細(xì)菌只能在無氧環(huán)境下生長,即厭氧培養(yǎng)法,目前常用的厭氧培養(yǎng)法有厭氧罐法、氣袋法及厭氧箱等。
3. 細(xì)菌的鑒定和分類
把獲得純培養(yǎng)的細(xì)菌進(jìn)行一系列生物學(xué)特性的檢查,并確定其分類學(xué)上的位置,這個過程叫細(xì)菌鑒定。細(xì)菌生物學(xué)性狀包括菌落形態(tài)、菌體形態(tài)、染色性質(zhì)、生化反應(yīng)以及血清學(xué)反應(yīng)特性和特異性噬菌體等。
細(xì)菌的分類是根據(jù)其營養(yǎng)方式及各種生物學(xué)特性親緣關(guān)系,將細(xì)菌劃分為不同的門、綱、目、科、屬、種,其基本分類單位是種。
(1)菌落形態(tài):菌落的特征是識別細(xì)菌的重要依據(jù),觀察菌落特征時應(yīng)注意:邊緣是整齊的、還是鋸齒的,表面是光滑的、還是粗糙的,中間是突起的、還是凹陷的,是透明的、還是半透明或不透明的。如乙型溶血性鏈球菌,在血瓊脂平皿上,菌落灰白色,圓形,中央稍凸起,透明或半透明,表面光滑,菌落周圍可見透明的溶血環(huán)。而綠膿桿菌,在選擇性培養(yǎng)基(NAC)上菌落扁平,邊緣不整齊,大小不一,表面濕潤、有光澤,菌落周圍有藍(lán)綠色或褐色色素擴(kuò)散,但也有不產(chǎn)生色素的菌株。這些菌落特征在細(xì)菌的鑒定中均有一定意義。
(2)細(xì)菌的生化反應(yīng)特性:各種細(xì)菌具有各自*的酶系統(tǒng),因而在代謝過程中所產(chǎn)生的分解與合成代謝產(chǎn)物也不同。這些代謝產(chǎn)物又各具不同的生化特點。根據(jù)此特點,利用生物化學(xué)方法來鑒別不同細(xì)菌,稱為細(xì)菌的生化反應(yīng)試驗。生化反應(yīng)試驗方法很多,主要有以下幾種:
①糖(醇)類發(fā)酵試驗:是鑒定細(xì)菌的生化反應(yīng)試驗中zui主要的試驗,不同細(xì)菌可發(fā)酵不同的糖類,如沙門菌可發(fā)酵葡萄糖,但不能發(fā)酵乳糖,大腸桿菌則可發(fā)酵葡萄糖和乳糖;即使兩種細(xì)菌均可發(fā)酵同一種糖類,其發(fā)酵結(jié)果也不盡相同,如志賀菌和大腸桿菌均可發(fā)酵葡萄糖,但前者僅產(chǎn)酸,而后者則產(chǎn)酸、產(chǎn)氣,故可利用此試驗鑒別細(xì)菌。
②葡萄糖代謝類型鑒別試驗:可用于葡萄球菌與微球菌的鑒別。
③β-半乳糖苷酶試驗(ONPG):分解乳糖的細(xì)菌ONPG試驗為陽性,如埃希氏菌屬、枸櫞酸桿菌屬、克雷伯菌屬和沙雷氏菌屬等。而不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌如沙門菌、變形桿菌和腸桿菌科中其他不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌ONPG試驗均為陰性。
④其他生化試驗:如淀粉水解試驗、七葉苷水解試驗、甲基紅試驗及VP試驗等。
(3)革蘭氏染色法:染色除能觀察細(xì)菌形態(tài)外,還可根據(jù)其染色反應(yīng),將細(xì)菌分為革蘭氏陽性和革蘭氏陰性菌兩大類。如沙門菌屬、志賀菌屬、巴斯德桿菌及耶爾森菌等均為革蘭氏陰性菌,革蘭氏陽性菌有肺炎鏈球菌、單核細(xì)胞增生性李斯特桿菌、金葡萄球菌、鼠棒狀桿菌等。
(4)血清學(xué)鑒定:除生化鑒定外,必要時可進(jìn)行血清學(xué)鑒定。如沙門菌屬、志賀菌屬、綠膿桿菌、耶爾森菌等均可做血清學(xué)分型試驗。
根據(jù)送檢動物的不同級別,對所需檢查的病原菌進(jìn)行逐項排查,zui后得出檢測結(jié)論。