小鼠ELISA試劑盒的整體概念。接著分別從原理、特點(diǎn)和使用方法三個(gè)方面進(jìn)行說明。在原理部分，簡(jiǎn)述了抗原 - 抗體特異性結(jié)合反應(yīng)的過程。特點(diǎn)方面突出了高靈敏度、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便和穩(wěn)定性好等優(yōu)勢(shì)。使用方法則按照一般的實(shí)驗(yàn)流程，從樣本處理到最終測(cè)定進(jìn)行了較為詳細(xì)的描述。

     采用抗原 - 抗體特異性結(jié)合反應(yīng)。將已知的抗原或抗體固定在固相載體表面，加入待檢測(cè)的小鼠ELISA試劑盒樣本，樣本中的目標(biāo)分子與固相載體上的抗原或抗體結(jié)合，再加入酶標(biāo)記的二抗，通過酶催化底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)，根據(jù)顏色的深淺來確定目標(biāo)分子的含量。

一、操作步驟：

1．使用前，將所有小鼠ELISA試劑盒充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2．根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3．加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。

4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，小鼠ELISA試劑盒輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7.   每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8．取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。

9．在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。 需要而未提供的小鼠ELISA試劑盒和器材。

二、特點(diǎn)：

高靈敏度：能夠檢測(cè)到微量的目標(biāo)分子。

特異性強(qiáng)：對(duì)特定的目標(biāo)分子具有高度的選擇性。

操作簡(jiǎn)便：無需復(fù)雜的儀器設(shè)備，實(shí)驗(yàn)步驟相對(duì)簡(jiǎn)單。

穩(wěn)定性好：小鼠ELISA試劑盒在一定的儲(chǔ)存條件下能夠保持較長(zhǎng)時(shí)間的穩(wěn)定性。

三、使用方法：

樣本處理：根據(jù)不同的目標(biāo)分子，對(duì)小鼠ELISA試劑盒樣本進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚怼?/p>

加樣：將標(biāo)準(zhǔn)品和處理后的樣本加入到小鼠ELISA試劑盒的微孔板中。

孵育：在特定的溫度和時(shí)間下進(jìn)行孵育，使抗原 - 抗體充分結(jié)合。

洗滌：去除未結(jié)合的物質(zhì)。

加酶標(biāo)二抗：加入酶標(biāo)記的二抗。

再次孵育和洗滌。

顯色：加入底物，產(chǎn)生顯色反應(yīng)。

測(cè)定：使用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值，計(jì)算目標(biāo)分子的含量。

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