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上海研域生物講解小鼠ELISA雙抗體夾心法操作步驟

2024-01-10 [689]

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小鼠ELISA雙抗體夾心法

(1)包被:用包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1-10 μg/mL。在酶標(biāo)板反應(yīng)孔中加0.1 mL,4℃過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗板3 次,每次3 min。

(2)加樣:加一定濃度稀釋的待檢樣品(同時(shí)做空白對(duì)照,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照)0.1 mL 于上述已包被的反應(yīng)孔中,置濕盒中,37℃, 1 hr。用洗滌緩沖液洗板3 次,每次3 min。

(3)加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體 (經(jīng)滴定后的稀釋度) 0.1ml。37℃,0.5 - 1 hr,用洗滌緩沖液洗板3 次,每次3 min。

(4)加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入現(xiàn)配的TMB 底物溶液0.1 mL,37 ℃,10 - 30min。

(5)終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入終止液0.05 mL。

(6)結(jié)果判定:將酶標(biāo)板在酶標(biāo)儀上,于450 nm (若ABTS 顯色,讀410 nm),讀數(shù),輸出到Excel 中。

(7)以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),生成標(biāo)準(zhǔn)曲線和直線回歸方程式,根據(jù)公式計(jì)算未知樣品的濃度,并記錄。

上海研域生物小鼠ELISA雙抗體夾心法采用進(jìn)口材料生產(chǎn),專業(yè)的酶免專家,提供免費(fèi)代測(cè),數(shù)據(jù)分析,技術(shù)服務(wù)。產(chǎn)品遠(yuǎn)銷全國(guó)各地。多年以來(lái)我們以極其苛刻的要求控制產(chǎn)品的質(zhì)量,堅(jiān)持生物科學(xué)研究與世界同步的理念。