在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的留意事項(xiàng)分為兩個(gè)關(guān)鍵：
一、做好對(duì)照
正式實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)別離以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照操控實(shí)驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以確保實(shí)驗(yàn)成果的性。有時(shí)本底較高，闡明有非特異性反響，可選用羊血清、兔血清或BSA等關(guān)閉。
二、實(shí)驗(yàn)條件的挑選
在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的挑選是很重要的，其間包括:
（1） 固相載體的挑選：很多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方式可所以凹孔平板、試管、珠粒等?，F(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體，在運(yùn)用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反響，調(diào)查其顯色反響是不是均一性，據(jù)此判明其吸附功能是不是杰出。
（2） 包被抗體（或抗原）的挑選：將抗體（或抗原）吸附在固相載體外表時(shí)，請(qǐng)求純度要好,吸附時(shí)一般請(qǐng)求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)刻及其蛋白量也有必定影響,一般多選用4℃ 18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的*適濃度需進(jìn)行滴定：即用不一樣的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進(jìn)行包被后，在其它實(shí)驗(yàn)條件相一起，調(diào)查陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。挑選OD值而蛋白量起碼的濃度。關(guān)于大都蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)一般為1～10μg/ml。
（3） 酶的底物及供氫體的挑選：對(duì)供氫體的挑選請(qǐng)求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反響，而自身無(wú)色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌效果，應(yīng)留意防護(hù)。有條件者應(yīng)運(yùn)用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是現(xiàn)在較為滿足的供氫體。底物效果一段時(shí)刻后，應(yīng)參加強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以停止反響。一般底物效果時(shí)刻，以10-30分鐘為宜。底物運(yùn)用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前參加。（4） 酶符號(hào)抗體作業(yè)濃度的挑選：首先用直接ELISA法進(jìn)行開(kāi)始效價(jià)的滴定（見(jiàn)酶符號(hào)抗體部份）。然后再固定其它條件或采納“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶符號(hào)抗體別離為不一樣的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)體系里地滴定其作業(yè)濃度。